جدا سازی ژن گلوکز اکسیداز آسپرژیلوس نایجر و کلونینگ آن در پروکاریوت‌ها

سابقه و هدف: گلوکزاکسیداز آنزیمی است که در صنایع غذایی، شیمیایی، آرایشی و بهداشتی و همچنین در کیت‌های تشخیص گلوکز استفاده می‌شود. هدف این مطالعه شناسایی و جداسازی این ژن از ژنوم قارچ آسپرژیلوس نایجر از طریق PCR و کلونینگ آن درE. coli به منظور پایه‌ای برای تولید گلوکزاکسیداز نوترکیب در ایران است. مواد و روش‌ها: قارچ آسپرژیلوس نایجر (ATCC 9029) در محیط حاوی پپتون و گلوکز و عصاره مالت و در حرارت ºc 24 به مدت 72-48 ساعت کشت داده شد. DNA ژنومی قارچ به وسیله سونیکت کردن همراه با ساییدن قارچ سونیکت شده در نیتروژن مایع در بافر لیزکننده شامل EDTA و SDS استخراج شد. برای جداسازی ژن، یک جفت پرایمر طراحی شد و در شرایط بهینه شده PCR، ژن گلوکزاکسیداز تکثیر شد. سپس این ژن به وسیله Ins T/Aclon Tm PCR product cloning kit به داخل پلاسمید pTZ57R کلون و در داخل میزبان DH5α،E. coli ترانسفورم شد. نقشه ژنی این پلاسمید نوترکیب با آنزیم‌های محدودکننده، تأیید و پلاسمید نوترکیب pTZ57RGO نامیده شد. یافته‌ها: نتایج نشان داد که روش استفاده شده در این مطالعه برای کشت و استخراج DNA از قارچ‌های رشته‌ای نظیر آسپرژیلوس مناسب است. همچنین ژن کدکننده آنزیم گلوکزاکسیداز که به وسیله تکنیک PCRجدا شده است دارای اندازه صحیح در آگاروز ژل الکتروفورزیس می‌باشد. ما نشان دادیم پلاسمید نوترکیب pTZ57RGOدر Restriction analysis دارای الگوی صحیح می‌باشد. نتیجه‌گیری: در این مطالعه ما ژن گلوکز اکسیداز را از طریق بهینه سازی شرایط PCR از آسپرژیلوس نایجر جدا و در یک میزبان پروکاریوتیک، کلون کردیم. این اولین گزارش از جداسازی و کلونینگ این ژن از طریق مهندسی ژنتیک در ایران است که می‌تواند برای کلونینگ در وکتور بیانی به منظور تولید این آنزیم به‌صورت نوترکیب به کار رود.